Vergleich Mykoplasmen Test-Kits für die Zellkultur (Forschung und GMP)
Wenn sie einen Mykoplasmen-Test kaufen wollen, können sie unsere Übersicht und einen Vergleich der verschiedenen Anbieter von Mykoplasmentests und Kits als Entscheidungshilfe nutzen. Ein solcher hersteller-Vergleich ist äußerst empfehlenswert, da sich Preise und Nachweisgrenzen sowie Detektions-Spektren deutlich unterscheiden. Außerdem haben wir eine kurze Darstellung des Testprinzips für einen PCR Nachweis und eine DAPI Färbung als Erläuterung dargestellt. Schauen Sie genau nach, was die Kits können und was nicht, bevor sie ein Kit kaufen! Weitere Hilfestellung bekommen Sie auch in unseren Kursen Kontaminationsvermeidung, Aseptik und Hygiene, Qualitätsmanagement sowie Mykoplasmennachweis und Eliminierung.
Die folgenden Themen finden Sie auf dieser Seite:
Mykoplasmen-Nachweis-Methoden und Kits kaufen
Unter den Nachweis-Methoden für Mykoplasmen gibt es zwei besonders empfehlenswerte Mykoplasmentest oder Kit-Arten. Zum einen ein schneller und einfacher Mykoplasmentest mit DAPI oder Hoechst-Farbstoffen und zum zweiten der sensitive und günstige Mykoplasmen-Nachweis über PCR Kits. Im Folgenden sind zwei Beispiele dargestellt, wie man z.B. eine neue Charge von FCS testen kann.
PCR Test-Kits für Mykoplasmen
Im ersten Beispiel wird das zu testende Reagenz (hier z.B. eine neue FCS Charge) zu einer sauberen Zellkultur gegeben und diese 7 Tage damit kultiviert (länger ist natürlich sicherer). Danach wird mit einem kommerziellen Mycoplasmen-Kit der Zellkultur-Überstand mittels PCR getestet und im Gel ausgewertet.
Images courtesy of InCelligence, Eppendorf AG, PromoCell GmbH and F. Timm Seabra Souza
Video zum Mykoplasmentest aus unserem MOOC
In diesem Video zeigen zwei Studenten wie man den Mykoplasmen-Kit IC von PromoKine benutzt (Dieses Kit gib es jetzt bei Minerva und Sigma, aber nicht mehr bei PromoCell bzw. PromoKine). Das Video ist in englischer Sprache, sollte aber gut zu verstehen sein, auch wenn man nicht so gut Englisch spricht. Das Video stammt aus unserem DNA MOOC.
See how a mycoplasma PCR is performed in the lab using a Mycoplasma kit that is not any more available but still shows the general principle. Besides that, encounter Can, Andrei and Ulla who are BCCB 3rd year students at Jacobs University, Bremen and have a laugh with them. The video is a little longer than 20min, but as it is part of our DNA MOOC is shows all steps and explains all components of the kit. start video...
Further videos from the MOOC: DNA - from structure to therapy are on our MOOC page.
Mykoplasmen-Test mittels DAPI Färbung
Im zweiten Beispiel geht man anfangs identisch vor, allerdings fixiert man die Zellen am Ende und färbt sie mit DAPI oder Hoechst. Nun kann man eventuelle Mykoplasmen-Kontaminationen im Fluoreszenz-Mikroskop erkennen. Dieser Mykoplasmen-Nachweis ist allerdings deutlich weniger sensitiv als die PCR Methode. Wer diese Methode als einzige nutzen möchte, sollte immer eine Inkubationszeit von mindestens 14-21 Tagen einhalten.
Mykoplasmen-Nachweis-Kits PCR - Pharma-Niveau (Freigabeprüfungen, validiert)
| Firma | Methode/NWG/GMP | Spezies | Preis | Bemerkungen: Pharma-Kits |
| Greiner BioOne |
PCR- Mikroarray Kit <10 KBE GMP: + |
alle (ja/nein), (EuPharm 9 von 7-9) 40 (identifiziert) |
>560 |
Positivkontrolle: ja |
| Roche |
PCR-Gel Kit <10 KBE GMP: + |
alle (ja/nein), (EuPharm ? von 7-9) | >500 |
Positivkontrolle: ja |
Mykoplasmen-Nachweis-Kits PCR - Pharma QK und Forschungsniveau
| Firma | Methode/NWG/GMP | Spezies | Preis | Bemerkungen: Research kits |
| Sartorius |
qPCR keine Angabe GMP: - |
Semi-quantitativ
|
Positivkontrolle: ja Validiert nach EP 2.6.7 für: sensitivity, specificity, and robustness. Erfüllt auch Kriterien der USP und JP. |
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| Southern Biotech |
PCR 1000-2500 KBE GMP: - |
20 (ja/nein) =
|
Positivkontrolle: ja Interne Kontrolle: ja |
|
| Minerva |
PCR-Gel Kit <1000-2500 KBE/mL GMP: - |
28 (ja/nein) = Detektion von
|
<10,34 | Positivkontrolle: ja Interne Kontrolle: ja Dieser Kit stellt eine methodische Vereinfachung dar. Die Tubes enthalten bereits Nukleotide, der MasterMix ist fertig und enthält auch schon Ladepuffer. Damit entfallen viele Pipettierschritte. Außerdem ist die Positivkontrolle in eigenen Tubes vorgelegt, sodass seltener Kontaminationen vorkommen. 4 Pipettierschritte insg. VenorGeM Advance |
| Sigma |
PCR-Gel Kit <1000-2500 KBE/mL GMP: - |
19 (ja/nein) = Detektion von
|
<9,96 | Positivkontrolle: ja Interne Kontrolle: ja Dieser Kit stellt eine methodische Vereinfachung dar. Die Tubes enthalten bereits Nukleotide, der MasterMix ist fertig und enthält auch schon Ladepuffer. Damit entfallen viele Pipettierschritte. Außerdem ist die Positivkontrolle in eigenen Tubes vorgelegt, sodass seltener Kontaminationen vorkommen. 4 Pipettierschritte insg. LookOut® |
Mykoplasmen-Nachweis-Kits - ohne interne Kontrolle (wenig empfehlenswert)
| Firma | Methode/NWG/GMP | Spezies | Preis | Bemerkungen:keine interne Kontrolle |
| R&D Systems |
Hybridization- ELISA Kit ~15 - 2500 KBE/mL GMP: - |
8 (ja/nein) = Detektion von
|
~4 | Positivkontrolle: ja Interne Kontrolle: nein In diesem Assay wird rRNA von Mykoplasmen über einen ELISA colorimetrisch nachgewiesen. Der Assay kreuzreagiert mit Lactobacillus und ist damit nicht mykoplasmen-spezifisch. Dauert ca. 4,5 Stunden, mehrere Waschschritte. Kann Überstände und Zelllysate analysieren. MycoProbe® |
| Agilent |
PCR-Gel Kit n.a. GMP: - |
die meisten (ja/nein) | ~9,8 | Positivkontrolle: ja Interne Kontrolle: nein Dieser Kit enthält nur Primer. Polymerase und Reaktionspuffer sind nicht enthalten. Über einen Restriktionsverdau können 5 Spezies identifiziert werden. Es wird nicht angegeben, welche Mykoplasmen genau mit "die meisten" gemeint ist. Die interne Kontrolle ist nur eine DNA und somit eine PCR-Kontrolle. Mycoplasma Plus Primer set |
| Millepore |
rRNA keine Angabe GMP: - |
Keine Angabe | Milliprobe. Leider ist die Seite wirklich schlecht. Man findet den Test kaum bis gar nicht und wenn doch findet man leider keine Infos. Eurofins scheint diesen Mykoplasmennachweis zu verwenden. |
Mykoplasmen-Nachweis-Kits - weniger sensitive Methoden
| Firma | Methode/NWG/GMP | Spezies | Preis | Bemerkungen: Pharma-Kits |
| N.A. |
Hoechst oder DAPI Färbung NWG: 1 bis 100 Mio. GMP: Inprozesskontrolle |
Alle. | Immunfluoreszenz mittels DAPI oder Hoechst-Färbung zeigt Mykoplasmen als Schleier auf der Zelloberfläche. Wenig sensitiv ohne langwierigen Assay. Aber schnell und extrem günstig. Für Forschungslabore die mikroskopieren immer eine gute Zusatztestung! | |
| Lonza |
Lumineszenz NWG: 10.000 bis 1.000.000/mL GMP: nein |
Keine Angabe. |
Photometrische Bestimmung von Reaktionsprodukten im Zellkulturmedium nach Zugabe eines Reagenzes mittels ELISA Reader. Schnell. Mycoalert |
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| Invivogen |
Isothermale PCR, Testkammern NWG: mit 100 CFU/mL angegeben GMP: nein |
U.a.: M. orale, M. hyorhinis, M. arginini, M. fermentans, M. hominis, and A. laidlawii. | Testkammern, ähnlich den Corona-Schnelltests mit 1 oder 2 Banden nach Ende der Reaktion, Schnell. | |
| Invivogen |
Zell-basierte Absorbanz NWG: 5*102-5*105 CFU/ml GMP: nein |
Wahrscheinlich mind. M. orale, M. hyorhinis, M. arginini, M. fermentans, M. hominis. Keine genau Angabe. Kreuzreagiert mit manchen Bakterien. |
Positivkontrolle: ja PlasmoTest™ features two major constituents: the Mycoplasma sensor cells and the HEK-Blue™ Detection medium.
Mit Hilfe einer Detektorzelllinie werden Mykoplasmen im Zellkulturmedium von Testzellen nachgewiesen. Messung über ELISA Reader oder optisch innerhalb einer Platte. |
|
|
BioTool / Bimake |
Farbtest of Metaboliten Kit 10.000/mL GMP: - |
Keine Angabe zu detektierten Arten. Geht nicht mir serumfreien Medien und allen F12-basierten Medien. | ~ 1,5 |
Positivkontrolle: ja Durchführung dauert ca. 1h. Auswertung rein optisch, also ohne Reader ohne mit dem zweiten Kit über einen ELISA Reader. |
| Molecular Probes |
Fluoreszenzmikroskopie Kit NWG keine Angabe, ca. 10^6-8 KBE/mL GMP: ? |
Keine Angabe zu detektierten Arten, wahrscheinlich breites Spetrum, aber mit Kreuzreaktionen. | ~3,5 |
Positivkontrolle: ja, aber Partikel Durchführung dauert ca. 30min bis 1h je nach Anzahl an Proben. Aufwendiges Handling von Deckgläsern und Fixativ. |
* Price is price/sample when purchasing a normal size kit including all reagents.
Anforderungen der EuPharm. für GMP:
Folgende Stämme werden für die Validierung eines Mykoplasmen-Nachweises gemäß Pharmacopoiea als Kontrollstämme gefordert. Die Nachweisgrenzen, die man erreichen muss, liegen je nach Test bei 10-100 KBE pro ml. Je nach Produkt wird ein (vorgegebener) Stamm auch als Positivkontrolle mitgetestet:
- A. laidlawii
- Mycoplasma fermentans
- Mycoplasma hyorhinis (where cell-culture enrichment is used, a fastidious strain such as ATCC 29052 is included)
- Mycoplasma orale
- Mycoplasma pneumoniae or M. gallisepticum
- Mycoplasma synoviae (where there is use of or exposure to avian material during production)
- Mycoplasma arginini
- Spiroplasma citri (where there is use of or exposure to insect or plant material during production)
Um die Validierung durchzuführen, muss man mit Mykoplasmen-Referenzstämmen arbeiten. Diese werden in das eigene Material (Matrix) gespickt, also in bekannter Konzentration zugegeben. Im Vergleich mit einer Eichkurve bestimmt man dann z.B. die Wiederfindungsrate und Nachweisgrenze. Referenzstämme kann man bei verschiedenen Zellbanken und Stammsammlungen kaufen.
Die wichtigsten Zellkultur-Mykoplasmen sind
- Mycoplasma orale
- Mycoplasma hyorhinis
- Mycoplasma arginini
- Mycoplasma fermentans
- Mycoplasma salivarium
- Mycoplasma hominis