Welche Mykoplasmen-Test-Kits für die Zellkultur (Forschung und GMP) gibt es? - Vergleich

Für den Mykoplasmen-Nachweis in Zellkulturen stehen unter anderem PCR, qPCR, RT-qPCR, dPCR, isothermale Amplifikation, Fluoreszenzfärbungen und zellbasierte Verfahren zur Verfügung. Für Forschung und Routine-Screening können einfachere Systeme ausreichend sein; für pharmazeutische Qualitätskontrolle und Freigabeprüfungen gelten dagegen die Anforderungen der Europäischen Pharmakopöe (Ph. Eur.) 2.6.7. Die seit 1. April 2026 geltende Revision fordert bei NAT-basierten Verfahren unter anderem eine geeignete Validierung, produkt- bzw. matrixspezifische Eignungsprüfung und geeignete Kontrollen. Die zum 1. Januar 2027 in Kraft tretende Ph. Eur. 13.1 ändert Kapitel 2.6.7 nach der veröffentlichten Inhaltsübersicht nicht erneut; die Anforderungen aus Ph. Eur. 12.2 gelten damit auch 2027 weiter.

Wenn Sie einen Mykoplasmen-Test kaufen möchten, können Sie unsere Übersicht und den Vergleich verschiedener Anbieter als Entscheidungshilfe nutzen. Preise, Nachweisgrenzen, Spektrum, Kontrollen und regulatorische Eignung unterscheiden sich erheblich. Besonders wichtig ist die Unterscheidung zwischen Forschungs-/Screening-Kits und Systemen, die für eine validierte GMP-Freigabeprüfung nach Ph. Eur. 2.6.7 vorgesehen sind.

Mykoplasmen-Nachweis-Methoden und Kits kaufen

Unter den Nachweis-Methoden für Mykoplasmen gibt es verschiedene Mykoplasmen-Test- und Kit-Arten. Zum einen ein schneller und einfacher Mykoplasmen-Test mit DAPI oder Hoechst-Farbstoffen und zum zweiten der sensitive und günstige Mykoplasmen-Nachweis über PCR-Kits. Im Folgenden sind zwei Beispiele dargestellt, wie man z.B. eine neue Charge von FCS testen kann.

Wie funktionieren PCR-Test-Kits für Mykoplasmen?

Im ersten Beispiel wird das zu testende Reagenz (hier z.B. eine neue FCS-Charge) zu einer sauberen Zellkultur gegeben und diese 7 Tage damit kultiviert (länger ist natürlich sicherer). Danach wird mit einem kommerziellen Mycoplasmen-Kit der Zellkultur-Überstand mittels PCR getestet und im Gel ausgewertet.

Images courtesy of InCelligence, Eppendorf AG, PromoCell GmbH and F. Timm Seabra Souza

Video zum Mykoplasmentest mittels PCR aus unserem MOOC

In diesem Video zeigen zwei Studenten wie man den Mykoplasmen-Kit IC von PromoKine benutzt (Dieses historische Kit ist nicht mehr bei PromoCell bzw. PromoKine erhältlich; vergleichbare konventionelle PCR-Kits werden heute unter anderem von Minerva Biolabs und Merck/Sigma-Aldrich angeboten, aber nicht mehr bei PromoCell bzw. PromoKine). Das Video ist in englischer Sprache, sollte aber gut zu verstehen sein, auch wenn man nicht so gut Englisch spricht. Das Video stammt aus unserem DNA MOOC.

See how a mycoplasma PCR is performed in the lab using a  Mycoplasma kit that is not any more available but still shows the general principle. Besides that, encounter Can, Andrei and Ulla who are BCCB 3rd year students at Jacobs University, Bremen and have a laugh with them. The video is a little longer than 20min, but as it is part of our DNA MOOC is shows all steps and explains all components of the kit.  Video auf der DNA-MOOC-Seite ansehen...

Further videos from the MOOC: DNA - from structure to therapy are on our  MOOC page.

Wie funktioniert ein Mykoplasmen-Test mittels DAPI-Färbung?

Im zweiten Beispiel geht man anfangs identisch vor, allerdings fixiert man die Zellen am Ende und färbt sie mit DAPI oder Hoechst. Nun kann man eventuelle Mykoplasmen-Kontaminationen im Fluoreszenz-Mikroskop erkennen. Dieser Mykoplasmen-Nachweis ist allerdings deutlich weniger sensitiv als die PCR Methode. Wer diese Methode als einzige nutzen möchte, sollte immer eine Inkubationszeit von mindestens 14-21 Tagen einhalten.

Welche Mykoplasmen-Nachweis-Kits gibt es? - Pharma-Niveau und Freigabeprüfungen

Für neue GMP-Freigabeprüfungen sollte ein System gewählt werden, dessen Hersteller die Eignung für die seit 1. April 2026 geltende Ph. Eur. 2.6.7 (12.2) belegt und das zusammen mit geeigneter Probenaufarbeitung, externer Positivkontrolle und produkt-/matrixspezifischer Eignungsprüfung eingesetzt wird. Die Anforderungen gelten auch 2027 weiter.

Welche Mykoplasmen-Nachweis-Kits gibt es? - Pharma-QK und Forschungsniveau

Die folgenden Systeme sind für Forschung, Screening oder industrielle Routinekontrollen verfügbar. Sie sind nicht automatisch für eine neue Freigabeprüfung nach Ph. Eur. 2.6.7 (12.2) geeignet.

Welche Mykoplasmen-Nachweis-Kits sind nicht empfehlenswert ? - ohne interne Kontrolle (wenig empfehlenswert)

Welche Mykoplasmen-Nachweis-Kits gibt es noch? - weniger sensitive Methoden

* Preise sind Herstellerpreise bzw. historische Angaben zum genannten Stand und wegen unterschiedlicher Kitgrößen nicht direkt vergleichbar.

Welche Anforderungen stellt die Ph. Eur. an Mykoplasmennachweise unter GMP?

Die revidierte Ph. Eur. 2.6.7 Mycoplasmas wurde in Ausgabe 12.2 veröffentlicht und ist seit 1. April 2026 verbindlich. Die zum 1. Januar 2027 wirksam werdende Ph. Eur. 13.1 führt nach der veröffentlichten Inhaltsübersicht keine erneute Revision von Kapitel 2.6.7 ein. Für 2027 gelten daher weiterhin die Anforderungen der Revision 12.2.

• Die Prüfstrategie ist stärker risikobasiert und weniger preskriptiv als zuvor.
• Kultivierbare und nicht kultivierbare Mykoplasmen müssen zuverlässig erfasst werden. Kultur und Indikatorzellkultur können unter den in Kapitel 2.6.7 beschriebenen Bedingungen durch eine ausreichend validierte Nukleinsäure-Amplifikationstechnik (NAT) ersetzt werden.
• Für NAT wird eine analytische Empfindlichkeit von ≤10 CFU/mL oder <100 Genomkopien (GC)/mL zugrunde gelegt.
• Referenzmaterialien für die Validierung müssen geeignet charakterisiert sein; für CFU-basierte Standards wird ein Verhältnis von Genomkopien zu CFU von <10 gefordert, sofern nicht begründet anders.
• Eine externe Positivkontrolle nahe der Nachweisgrenze dient der Überprüfung der validierten Empfindlichkeit.
• Für die konkrete Produktmatrix ist ein Test auf inhibitorische Substanzen bzw. eine produkt-/matrixspezifische Eignungsprüfung erforderlich.
• Wenn möglich sollen sowohl Zellen als auch Überstand in die Probenahme einbezogen werden.
• Die Auswahl der Validierungsstämme erfolgt risikobasiert. Neben den pharmakopöisch vorgeschlagenen Spezies können abhängig von Produkt und Herstellprozess weitere relevante Spezies erforderlich sein.

Folgerung für die Tabellen auf dieser Seite: Ein Forschungs-Kit ist nicht allein deshalb Ph.-Eur.-konform, weil es PCR/qPCR verwendet oder eine Nachweisgrenze im Bereich von 10 CFU/mL erreicht. Für neue GMP-Freigabeprüfungen müssen der vollständige Workflow, die Kontrollen, die Referenzmaterialien, die Validierung und die konkrete Produktmatrix die Anforderungen von Ph. Eur. 2.6.7 erfüllen.

Was sind die häufigsten Zellkultur-Mykoplasmen im Labor?

• Mycoplasma orale
• Mycoplasma hyorhinis
• Mycoplasma arginini
• Mycoplasma fermentans
• Mycoplasma salivarium
• Mycoplasma hominis

Weiterführende Informationen

• Mykoplasmen-Kontaminationen in der Zellkultur
• Zellkultur-Kontaminationen
• Bakterien, Hefen und Pilze
• Antibiotika in der Zellkultur
• Zellbanken und Zellkultur-Stammsammlungen